Jeg har haft succes med 1,5% agarosegel i TBE præfarvet med geleret. Jeg bruger en 10.000 gange stamopløsning af geleret, der sælges af http://biotium.com. Jeg visualiserer gelen på en gammel fotodyne UV-transilluminator.

Efter at have smeltet agarose i det passende volumen TBE i en mikrobølgeovn, lod jeg den køle ned til ca. 50 ° C (jeg kan røre ved kolben med bagsiden af ​​min hånden uden at rive den væk) og tilsæt derefter den passende mængde geleret lager.

Til en 30 ml 1,5% agarosegel:

1. bland 0,45 g agarose + 30 ml 1x TBE
2. mikrobølgeovn indtil agaroseopløsning koger og klarer
3. lad afkøle til ca. 50 ° C
4. tilsæt 3 uL geleret
5. hvirvler blandingen
6. støb gelen (glem ikke kam)

Dette fungerer typisk for mig. Jeg kører gelen i en 1x TBE-buffer ved omkring 120 volt.

Jeg synes ikke, du skal bruge til at variere koncentrationen af ​​GelRed. Mine kom med instruktioner om den nøjagtige koncentration og hvordan man fortynder den. Eventuelt kan der tilsættes salt, hvilket jeg gjorde, og det har fungeret for mig.

Jeg har kun gjort dette med efterfarvning. 1-2,5% agarose med TAE. Brugte en 10.000x løsning fra Phenix research. Den gelerede stamopløsning og arbejdsopløsningen skal holdes i mørke. Jeg antager dog, at du har en transilluminator og (valgfri) filtre til visuel. GelRed har lignende excitations- og emissionsegenskaber [bølgelængde] som EtBr, så en standard transilluminator og et filter skal fungere uden ændringer. Det vil ikke være synligt med det blotte øje.

Når det er sagt, er der masser af ting, der kan gå galt i støbning af gelen, eletroforese, farvning og visualisering. Hvis bånd er synlige, men bare slørede, var jeg mistænkt for, at der er mere af et problem med enten gelskabelsen eller eletroforesen. Sørg for, at agarose er helt klar og afkølet lidt inden hældning. Ellers er spænding en af ​​de vigtigste ting, jeg har bemærket, og som kan have betydelig indflydelse på, hvor skarpe eller slørede bånd der vises. Du kan prøve forskellige% geler og forskellige spændinger. Der er formler, der kan hjælpe dig med at estimere den bedste værdi for hver af disse.