Hvis jeg holdt E. coli transformeret med plasmid ved -20˚C uden at fremstille glycerol, vil det overleve? Jeg har faktisk holdt det sådan i 18 timer. Hvad vil der ske med det? Vil det vokse i friske medier?
Hvis jeg holdt E. coli transformeret med plasmid ved -20˚C uden at fremstille glycerol, vil det overleve? Jeg har faktisk holdt det sådan i 18 timer. Hvad vil der ske med det? Vil det vokse i friske medier?
Over tid formoder jeg, at der dannes iskrystaller i kolonierne fra afrimningscyklusser i fryseren og fugtigheden i agaren. Dette vil medføre brud på bakteriemembranerne og kan med tiden ødelægge hovedparten af bakteriecellerne. Pladerne tørres også over tid fra afrimningscyklussen i fryseren. Du kan muligvis efterlade dem i fryseren et stykke tid, men jeg kan ikke forudse, at de overlever på ubestemt tid.
Hvis stammerne er virkelig vigtige, anbefaler jeg bare at suge den op og bruge den lille tid, der er nødvendig for at fremstille glycerollageret. Glycerol anvendes i bakteriestammer som et kryobeskyttende middel for at forhindre krystallisering af stamopløsningen.
Trehalose [1], [2] er det kryobeskyttende middel, der bruges af bakterier til at holde tingene i gang, når alt andet fryser (eller tørrer op), og de vokser også i det!
Trehalose akkumuleres dramatisk i mikroorganismer under varmechok og osmotisk stress og hjælper med at beskytte celler mod termisk skade og iltradikaler. Her demonstrerer vi en vigtig rolle for dette sukker i koldtilpasning af bakterier.