Jeg tror, ​​at celler beskadiges ved -20 ° C, ikke fordi de opbevares i lang tid, men fordi de gennemgår cyklus med optøning og frysning (de iskrystaller, der dannes, skader dem).

Jeg holder aldrig celler ved -20 ° C. Jeg opbevarer dem ved -80 ° C i 50% glycerol. Ideen bag glycerolen er, at den fungerer som kryobeskytter. Det danner hydrogenbindinger med vandmolekylerne og forstyrrer således vand-vand-hydrogenbindingerne. Som et resultat forstyrrer det krystaldannelsen af ​​is, og cellerne fryser ikke. Glycerols frysetemperatur er -37,8 ° C (60-70% glycerol i vand), hvilket betyder, at ved -20 ° C fryser glycerol ikke, og det kan således ikke beskytte cellerne mod skader fra dannelse af iskrystaller.

Gergana dækkede "hvorfor" -delen af ​​dit spørgsmål. +1

Hvis alt hvad du har i øjeblikket er -20 ° C og det meste, du vil gemme, er E. coli , der huser plasmider, vil jeg anbefale at fremstille plasmid-DNA og opbevare det ved -20 ° C. DNA vil forblive stabilt på mellemlang sigt, og du kan omdanne dig til E. coli når du har fået din -80 ° C fryser i gang. Og ideelt set vil du have både DNA-lagre og bakterielagre ved hånden - du ved aldrig, hvornår en fryser går ned.

For dine ikke-transformerede stammer kan du lave agarstænger eller plader til opbevaring ved 4 ° C. Jeg striber dem igen hver 1-2 uge, vokser natten over ved 37 ° C og sætter dem derefter tilbage i køleskabet.

Svarene, der allerede er sendt om glycerol, der er et kryobeskyttende middel, og iskrystaller er korrekte. Den anden ting at overveje er, at enzymer stadig bevarer en vis aktivitet ved -20 ° C, og selvom reaktionshastigheden er langsommere, vil cellerne nedbrydes, indtil de ikke længere er levedygtige. Jeg opbevarer altid glycerollagre af bakterier ved -80 ° C.

Mange almindelige E. Coli-stammer, der kommercielt anvendes til kloning, er ikke protease-fri, og det er de enzymer, der er ansvarlige for cellulær nedbrydning.